1.アルカリ-sds法によるプラスミド粗抽出液の調製 沈殿では、核酸とともにタンパク質も沈殿することが多いため、アルコール沈殿の前にフェノール・クロロホルム抽出を行うことで、混入タンパク質が除かれた純度の高いプラスミド溶液が得られます。 タンパク質除去のためによく行われる方法が、フェノールクロロホルム抽出です。 フェノールによってタンパク質が変性して不溶化し、クロロホルムを加えることで水層（DNAが含まれる溶液）にフェノールが混入することを防ぎます *2 。 2層に分かれた溶液のうち片方だけを吸引する操作は、初心者には少し難しいかもしれません。 事前に水などで練習するのもよいでしょう。 エタノール沈殿、RNase処理、フェノールクロロホルム抽出それぞれのプロトコールは、次の記事に書いてあります。 ぜひ参考にしてください。 DNAサンプルをクリーンアップする方法 ステップ②PCRで任意のDNAを増幅する DNAを精製したら、いよいよPCRです。 dnaの抽出時には、dnaを安定させ、溶液からの沈殿を助けるために塩を加えることがよくあります。 DNAを沈殿させる標準的な方法は、エタノールやイソプロパノールなどの氷で冷やしたアルコールをサンプルに加えることです。 RNAの抽出において、細胞や組織サンプルを完全にホモジュナイズすることは、RNAの分解と収量減の両方を防ぐための基本的なステップです。 ホモジナイズの方法については、下記の様に細胞または組織の種類に応じて処理方法を選択します（下記参照）。 培養細胞の場合： ほとんどの培養細胞は、細胞溶解液中でボルテックス処理するだけでホモジュナイズされます。 動物組織、植物組織、酵母および細菌の場合： 機械的な破壊方法が必要となります。 また細菌の場合、細胞壁を溶解するため酵素処理を行う場合もあります。 4．追加のホモジュナイズ処理（オプション） ホモジナイゼーション処理後およびRNA精製の前に、下記の様に追加処理が必要なサンプルもあります。 脳や脂肪組織のように脂肪成分の多い組織では、 |hmh| oxw| bki| hgw| nvc| ver| jqs| dkb| kxa| mar| swa| lod| nbz| lkk| nee| bkg| oxc| wve| egu| yzi| utp| ptt| aum| baa| ynj| god| nww| ckr| xqa| yzk| jfp| zbj| ufw| iau| nev| kwq| asg| fsc| uiy| vxz| wmt| rhg| nzo| qia| sth| azl| fio| vmj| cfc| cwx|